TIANcombi DNA Parçalama ve Det PCR Kiti

PCR tespiti için çeşitli materyallerden DNA'nın hızlı saflaştırılması.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kiti, hızlı genomik DNA hazırlama ve PCR amplifikasyonu için tüm reaktifleri içeren benzersiz bir ambalaj tasarımı benimser. Çeşitli numunelerden (bitki dokuları, tohumlar, hayvan dokuları, kan, maya ve bakteri) tek adımlı genom DNA saflaştırması ve ardından PCR amplifikasyonu ve tespiti için geçerlidir. Protein, RNA ve diğer ikincil metabolitlerin uzaklaştırılması, organik çözücü ekstraksiyonunun yanı sıra etanol çökeltme adımlarına tüm saflaştırma işleminde ihtiyaç duyulmaz, bu da işlemi basit ve hızlı hale getirir. Ürün kalitesi istikrarlı ve güvenilirdir.

Bu kit tarafından sağlanan 2× Det PCR MasterMix, proteinler gibi safsızlıkları gidermeye gerek kalmadan DNA'yı verimli ve spesifik olarak çoğaltabilen oldukça uyumlu bir PCR reaktifidir. Bu reaktif Taq DNA polimeraz, dNTP'ler, MgCl içerir₂, tampon ve ayrıca PCR reaksiyonu için geliştirici, optimize edici ve stabilizatör. Reaktifin uygulanması, PCR reaksiyonunu hızlı, basit, hassas, spesifik ve kararlı hale getirir. Bu nedenle, bu kit özellikle yüksek verimli tarama için uygundur.

Kedi. Numara	Paket boyutu
4992527	20 µl×50 rxn
4992528	20 µl×200 rxn

Bize e-posta gönder

Ürün ayrıntısı

Deneysel Örnek

SSS

Ürün etiketleri

Özellikleri

■ Basit ve hızlı: Farklı dokulardan DNA, sıvı nitrojen öğütmesine gerek kalmadan 5 dakika içinde çıkarılabilir.
■ Geniş uygulamalar: Bitki yaprakları, tohumlar, hayvan dokuları, kan örnekleri (taze kan, antikoagülasyon, kan pıhtıları, kuru kan lekeleri, vb.), maya ve bakteriler için geçerlidir.
■ Güçlü uyumluluk: PCR reaktifi, çeşitli örnek kaynaklarından ekstrakte edilen DNA'nın amplifikasyonu için uygundur.

Uygulamalar

■ Gen tespiti: Büyük ölçekli gen tespiti için ideal seçim.

Önemli notlar

■ Pamuk yaprakları gibi yüksek düzeyde fenol içeren numuneler için numune giriş miktarı kesinlikle 0,4 mg'dan az olmalıdır, aksi takdirde PCR reaksiyonu etkilenecektir.

Tüm ürünler ODM/OEM için özelleştirilebilir. Detaylar için,lütfen Özelleştirilmiş Hizmet'e tıklayın (ODM/OEM)

Öncesi: GDO Mahsul Ekstraksiyon ve Amplifikasyon Kiti

Sonraki: Doğrudan Kan PCR Kiti

	DNA sırasıyla mısır, buğday, pirinç, soya fasulyesi ve pamuğun 5 mg yaprak ve tohumlarından ekstrakte edildi. DNA, spesifik primerler kullanılarak PCR ile amplifiye edildi. Her şerit için toplam 20 µl eluentten 6 µl DNA yüklendi. 1: Pozitif kontrol genomu; 2: örnekleri bırakın; 3: tohum örnekleri; 4: NTC; 5: D2000 primerleri
	M: TIANGEN İşaretleyici D2000; 1: Pozitif kontrol; 2-7: Filtre kağıdındaki kurumuş kan lekesi sayısı sırasıyla 1-6; 8: Negatif kontrol. 3 mm zımba, ekstraksiyon testi için malzeme olarak filtre kağıdından kurutulmuş kan lekelerini almak için kullanıldı. Her şerit için toplam 20 µl eluentten 6 µl DNA yüklendi.
	M: TIANGEN İşaretleyici D2000; 1: Pozitif kontrol (kalıp olarak genomik DNA kullanıldı); 2-7: Eklenen kan miktarı sırasıyla 10 µl, 20 µl, 30 µl, 40 µl, 50 µl ve 60 µl'dir; 8-13: Eklenen kan miktarı sırasıyla 10 µl, 20 µl, 30 µl, 40 µl, 50 µl ve 60 µl'dir; 14: NTC. Toplam 20 µl eluentten 6 µl DNA agaroz jele yüklendi.

S: Amplifikasyon bandı yok

A-1 Şablonu

■ Şablon, protein safsızlıkları veya Taq inhibitörleri vb. içerir. ——DNA şablonunu saflaştırın, protein safsızlıklarını çıkarın veya saflaştırma kitleriyle şablon DNA'yı çıkarın.

■ Şablonun denatürasyonu tamamlanmadı ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

■ Şablon bozulması ——Şablonu yeniden hazırlayın.

A-2 Astar

■ Düşük kaliteli astar ——Astarı yeniden sentezleyin.

■ Primer bozulması ——Koruma için yüksek konsantrasyonlu primerleri küçük hacme bölün. Çoklu dondurma ve çözme işlemlerinden veya uzun süreli 4°C kriyoprezervasyondan kaçının.

■ Primerlerin uygun olmayan tasarımı (örneğin primer uzunluğu yetersiz, primerler arasında dimer oluşması vb.) - Primerleri yeniden tasarlayın (primer dimer ve sekonder yapı oluşumundan kaçının)

A-3 mg²⁺konsantrasyon

■ mg²⁺ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın²⁺konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-4 Tavlama sıcaklığı

■ Yüksek tavlama sıcaklığı, astar ve şablonun bağlanmasını etkiler. ——Tavlama sıcaklığını düşürün ve durumu 2°C'lik bir gradyanla optimize edin.

A-5 Uzatma süresi

■ Kısa uzatma süresi——Uzatma süresini artırın.

S: Yanlış pozitif

Olgular: Negatif örnekler aynı zamanda hedef dizi bantlarını da gösterir.

A-1 PCR Kontaminasyonu

■ Hedef dizi veya amplifikasyon ürünlerinin çapraz kontaminasyonu ——Negatif numunede hedef dizi içeren numuneyi pipetlememeye veya santrifüj tüpünden dökmemeye dikkat edin. Reaktifler veya ekipman, mevcut nükleik asitleri ortadan kaldırmak için otoklavlanmalı ve kontaminasyonun varlığı negatif kontrol deneyleri ile belirlenmelidir.

■ Reaktif kontaminasyonu ——Reaktifleri alikotlayın ve düşük sıcaklıkta saklayın.

A-2 Başbakanr

■ mg²⁺ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın²⁺ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

■ Uygun olmayan primer tasarımı ve hedef sekans, hedef olmayan sekans ile homolojiye sahiptir. ——Astarları yeniden tasarlayın.

S: Spesifik olmayan amplifikasyon

Olgu: PCR amplifikasyon bantları, büyük veya küçük olmak üzere beklenen boyutla tutarsız veya bazen hem spesifik amplifikasyon bantları hem de spesifik olmayan amplifikasyon bantları meydana geliyor.

A-1 Astar

■ Zayıf primer özgüllüğü

——Astarı yeniden tasarlayın.

■ Primer konsantrasyonu çok yüksek ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

A-2 mg²⁺ konsantrasyon

■ Mg²⁺ konsantrasyon çok yüksek ——Mg2+ konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-3 Termostabil polimeraz

■ Aşırı enzim miktarı ——Enzim miktarını 0,5 U aralıklarla uygun şekilde azaltın.

A-4 Tavlama sıcaklığı

■ Tavlama sıcaklığı çok düşük —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın veya iki aşamalı tavlama yöntemini benimseyin

A-5 PCR döngüleri

■ Çok fazla PCR döngüsü ——PCR döngüsü sayısını azaltın.

S: Yamalı veya lekeli bantlar

A-1 Astar——Kötü özgünlük ——Astarı yeniden tasarlayın, özgünlüğünü artırmak için astarın konumunu ve uzunluğunu değiştirin; veya yuvalanmış PCR gerçekleştirin.

A-2 Şablon DNA'sı

——Kalıp saf değil —— Kalıbı saflaştırın veya saflaştırma kitleriyle DNA'yı çıkarın.

A-3 mg²⁺ konsantrasyon

--Mg²⁺ konsantrasyon çok yüksek ——Mg'yi uygun şekilde azaltın²⁺ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-4 dNTP

——dNTP konsantrasyonu çok yüksek ——dNTP konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın

A-5 Tavlama sıcaklığı

——Çok düşük tavlama sıcaklığı —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın

A-6 Döngüleri

——Çok fazla döngü ——Döngü sayısını optimize edin

S: 50 µl PCR reaksiyon sistemine ne kadar şablon DNA eklenmelidir?

S: Uzun parçalar nasıl amplifiye edilir?

İlk adım, uygun polimerazı seçmektir. Normal Taq polimeraz, 3'-5' eksonükleaz aktivitesinin olmaması nedeniyle düzeltme okuyamaz ve uyumsuzluk, parçaların uzama etkinliğini büyük ölçüde azaltacaktır. Bu nedenle, düzenli Taq polimeraz, 5 kb'den büyük hedef fragmanları etkili bir şekilde çoğaltamaz. Özel modifikasyonlu Taq polimeraz veya diğer yüksek kaliteli polimeraz, uzatma etkinliğini artırmak ve uzun fragman amplifikasyonunun ihtiyaçlarını karşılamak için seçilmelidir. Ek olarak, uzun fragmanların amplifikasyonu aynı zamanda primer tasarımının, denatürasyon süresinin, uzatma süresinin, tampon pH'ının vs. uygun şekilde ayarlanmasını gerektirir. Genellikle 18-24 bp'lik primerler daha iyi verime yol açabilir. Şablon hasarını önlemek için, 94°C'deki denatürasyon süresi döngü başına 30 saniye veya daha azına düşürülmeli ve amplifikasyondan önce sıcaklığın 94°C'ye yükselme süresi 1 dakikadan az olmalıdır. Ayrıca, uzatma sıcaklığının yaklaşık 68°C'ye ayarlanması ve uzatma süresinin 1 kb/dk hızına göre tasarlanması, uzun fragmanların etkin amplifikasyonunu sağlayabilir.

S: PCR'nin amplifikasyon aslına uygunluğu nasıl geliştirilir?

PCR amplifikasyonunun hata oranı, yüksek doğrulukla çeşitli DNA polimerazları kullanılarak azaltılabilir. Şimdiye kadar bulunan tüm Taq DNA polimerazları arasında Pfu enzimi en düşük hata oranına ve en yüksek güvenilirliğe sahiptir (ekli tabloya bakınız). Enzim seçimine ek olarak araştırmacılar, tampon bileşimini optimize etme, termostabil polimeraz konsantrasyonu ve PCR döngü sayısını optimize etme dahil olmak üzere reaksiyon koşullarını optimize ederek PCR mutasyon oranını daha da azaltabilirler.

Mesajınızı buraya yazın ve bize gönderin