2×Taq PCR Karışımı

Ultra saf ve verimli Taq DNA polimeraz.

Taq DNA Polimeraz, Thermo aquatica DNA Polimeraz geni ile klonlanmış Escherichia coli'den indüklenen ve eksprese edilen, moleküler ağırlığı 94 kDa olan ve daha sonra saflaştırılan ve kolon saflaştırmasının üç aşaması ile ayrılan rekombinant bir proteindir. Enzim, eksojen nükleaz ve bakteriyel DNA kirliliği olmaksızın iyi stabiliteye ve güçlü özgüllüğe sahiptir ve rutin PCR amplifikasyonu için uygundur.

Tek tüplü Taq MasterMix (Ulusal Yüksek Teknoloji Ürün Sertifikası)

■ Taq MasterMix, PCR reaksiyonunun gelişmiş özgüllüğüne ve duyarlılığına sahiptir ve yüksek GC içeriği, ikincil yapı ve benzerleri ile karmaşık şablonları çoğaltabilir. Hedef şablonun en az 2 kopyası büyütülebilir, bu da daha doğru deneysel sonuçların alınmasını sağlar.

■ Eşsiz Taq MasterMix formülü, tüm reaksiyon sistemini çok kararlı hale getirir ve aktivite, tekrarlanan donma-çözülme veya 4°C'de uzun süreli depolamadan etkilenmez.

■ Kararlı ve verimli, önceden hazırlanmış PCR karma çözümü, işlemi hızlı ve basit hale getirerek emek yoğunluğunu ve örnekleme hatasını büyük ölçüde azaltır. Karışıma yüksek performanslı PCR geliştirici ve optimize edici de dahildir, bu da PCR koşullarındaki gereksinimleri azaltır.

■ Bu ürün hem boya içeren hem de içermeyen sistemlere sahiptir. Boya içeren MasterMix ürünleri, PCR'den sonra, tampon yüklemeden doğrudan elektroforezlenebilir.

Kedi. Numara Paket boyutu
4992229 1ml
4992230 5*1ml
4992255 1 ml
4992256 5×1 ml

Ürün ayrıntısı

Deneysel Örnek

SSS

Ürün etiketleri

Aktivite Tanımı

1 birim (U) Taq DNA Polimeraz'ın aktivitesi, şablon/primer olarak aktif somon sperm DNA'sı kullanılarak 30 dakika içinde 74℃'de asitte çözünmeyen maddelere 10 nmol deoksinükleotidleri dahil etmek için gereken enzim miktarı olarak tanımlanır.

Kalite kontrol

SDS-PAGE tespiti ile saflık %99'dan fazladır; Eksojen nükleaz aktivitesi saptanmadı; İnsan genomundaki tek kopya gen, etkili bir şekilde amplifiye edilebilir; Bir hafta boyunca oda sıcaklığında saklandığında önemli aktivite değişikliği olmaz.

Ana teknik parametreler

Enzim, 5'-3' polimeraz aktivitesine ve 5'-3' eksonükleaz aktivitesine sahiptir ve 3'-5' eksonükleaz aktivitesine sahip değildir. DNA polimerizasyonunun uzama hızı 70-75℃'de 1-2 kb/dk'dır. PCR ürünü, TA-klonlama vektöründe doğrudan klonlanabilen 3′-dA çıkıntılarına sahiptir.

Uygulamalar

Genellikle amplifikasyon, primer uzatma, dizileme ve <6 kb olan ve düşük sadakat gereksinimleri olan DNA'nın küt ucunda A-tailing için kullanılır.

Tüm ürünler ODM/OEM için özelleştirilebilir. Detaylar için,lütfen Özelleştirilmiş Hizmet'e tıklayın (ODM/OEM)


  • Öncesi:
  • Sonraki:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example 1 kb fragmanı yükseltmek için şablon olarak insan genomik DNA'sının kullanılması
    Experimental Example PCR reaksiyonundan sonra elektroforez tespiti için 5 µl alın.
    S: Amplifikasyon bandı yok

    A-1 Şablonu

    ■ Şablon, protein safsızlıkları veya Taq inhibitörleri vb. içerir. ——DNA şablonunu saflaştırın, protein safsızlıklarını çıkarın veya saflaştırma kitleriyle şablon DNA'yı çıkarın.

    ■ Şablonun denatürasyonu tamamlanmadı ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

    ■ Şablon bozulması ——Şablonu yeniden hazırlayın.

    A-2 Astar

    ■ Düşük kaliteli astar ——Astarı yeniden sentezleyin.

    ■ Primer bozunması ——Koruma için yüksek konsantrasyonlu primerleri küçük hacme bölün. Çoklu dondurma ve çözme işlemlerinden veya uzun süreli 4°C kriyoprezervasyondan kaçının.

    ■ Primerlerin uygun olmayan tasarımı (örneğin primer uzunluğu yetersiz, primerler arasında dimer oluşması vb.) - Primerleri yeniden tasarlayın (primer dimer ve sekonder yapı oluşumundan kaçının)

    A-3 mg2+konsantrasyon

    ■ mg2+ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın2+ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin2+ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon2+ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

    A-4 Tavlama sıcaklığı

    ■ Yüksek tavlama sıcaklığı, astar ve şablonun bağlanmasını etkiler. ——Tavlama sıcaklığını düşürün ve durumu 2°C'lik bir gradyanla optimize edin.

    A-5 Uzatma süresi

    ■ Kısa uzatma süresi——Uzatma süresini artırın.

    S: Yanlış pozitif

    Olgular: Negatif örnekler aynı zamanda hedef dizi bantlarını da gösterir.

    A-1 PCR Kontaminasyonu

    ■ Hedef dizi veya amplifikasyon ürünlerinin çapraz kontaminasyonu ——Negatif numunede hedef dizi içeren numuneyi pipetlememeye veya santrifüj tüpünden dökmemeye dikkat edin. Reaktifler veya ekipman, mevcut nükleik asitleri ortadan kaldırmak için otoklavlanmalı ve kontaminasyonun varlığı negatif kontrol deneyleri ile belirlenmelidir.

    ■ Reaktif kontaminasyonu ——Reaktifleri alikotlayın ve düşük sıcaklıkta saklayın.

    A-2 Başbakanr

    ■ mg2+ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın2+ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin2+ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon2+ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

    ■ Uygun olmayan primer tasarımı ve hedef sekans, hedef olmayan sekans ile homolojiye sahiptir. ——Astarları yeniden tasarlayın.

    S: Spesifik olmayan amplifikasyon

    Olgu: PCR amplifikasyon bantları, büyük veya küçük olmak üzere beklenen boyutla tutarsız veya bazen hem spesifik amplifikasyon bantları hem de spesifik olmayan amplifikasyon bantları meydana geliyor.

    A-1 Astar

    ■ Zayıf primer özgüllüğü

    ——Astarı yeniden tasarlayın.

    ■ Primer konsantrasyonu çok yüksek ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

    A-2 mg2+ konsantrasyon

    ■ Mg2+ konsantrasyon çok yüksek ——Mg2+ konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın: Mg'yi optimize edin2+ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon2+ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

    A-3 Termostabil polimeraz

    ■ Aşırı enzim miktarı ——Enzim miktarını 0,5 U aralıklarla uygun şekilde azaltın.

    A-4 Tavlama sıcaklığı

    ■ Tavlama sıcaklığı çok düşük —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın veya iki aşamalı tavlama yöntemini benimseyin

    A-5 PCR döngüleri

    ■ Çok fazla PCR döngüsü ——PCR döngüsü sayısını azaltın.

    S: Yamalı veya lekeli bantlar

    A-1 Astar——Kötü özgünlük ——Astarı yeniden tasarlayın, özgünlüğünü artırmak için astarın konumunu ve uzunluğunu değiştirin; veya yuvalanmış PCR gerçekleştirin.

    A-2 Şablon DNA'sı

    ——Kalıp saf değil —— Kalıbı saflaştırın veya saflaştırma kitleriyle DNA'yı çıkarın.

    A-3 mg2+ konsantrasyon

    --Mg2+ konsantrasyon çok yüksek ——Mg'yi uygun şekilde azaltın2+ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin2+ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon2+ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

    A-4 dNTP

    ——dNTP konsantrasyonu çok yüksek ——dNTP konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın

    A-5 Tavlama sıcaklığı

    ——Çok düşük tavlama sıcaklığı —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın

    A-6 Döngüleri

    ——Çok fazla döngü ——Döngü sayısını optimize edin

    S: 50 µl PCR reaksiyon sistemine ne kadar şablon DNA eklenmelidir?
    ytry
    S: Uzun parçalar nasıl amplifiye edilir?

    İlk adım, uygun polimerazı seçmektir. Normal Taq polimeraz, 3'-5' eksonükleaz aktivitesinin olmaması nedeniyle düzeltme okuyamaz ve uyumsuzluk, parçaların uzama etkinliğini büyük ölçüde azaltacaktır. Bu nedenle, düzenli Taq polimeraz, 5 kb'den büyük hedef fragmanları etkili bir şekilde çoğaltamaz. Özel modifikasyonlu Taq polimeraz veya diğer yüksek kaliteli polimeraz, uzatma etkinliğini artırmak ve uzun fragman amplifikasyonunun ihtiyaçlarını karşılamak için seçilmelidir. Ek olarak, uzun fragmanların amplifikasyonu aynı zamanda primer tasarımının, denatürasyon süresinin, uzatma süresinin, tampon pH'ının vs. uygun şekilde ayarlanmasını gerektirir. Genellikle 18-24 bp'lik primerler daha iyi verime yol açabilir. Şablon hasarını önlemek için, 94°C'deki denatürasyon süresi döngü başına 30 saniye veya daha azına düşürülmeli ve amplifikasyondan önce sıcaklığın 94°C'ye yükselme süresi 1 dakikadan az olmalıdır. Ayrıca, uzatma sıcaklığının yaklaşık 68°C'ye ayarlanması ve uzatma süresinin 1 kb/dk hızına göre tasarlanması, uzun fragmanların etkin amplifikasyonunu sağlayabilir.

    S: PCR'nin amplifikasyon aslına uygunluğu nasıl geliştirilir?

    PCR amplifikasyonunun hata oranı, yüksek doğrulukla çeşitli DNA polimerazları kullanılarak azaltılabilir. Şimdiye kadar bulunan tüm Taq DNA polimerazları arasında Pfu enzimi en düşük hata oranına ve en yüksek güvenilirliğe sahiptir (ekli tabloya bakınız). Enzim seçimine ek olarak araştırmacılar, tampon bileşimini optimize etme, termostabil polimeraz konsantrasyonu ve PCR döngü sayısını optimize etme dahil olmak üzere reaksiyon koşullarını optimize ederek PCR mutasyon oranını daha da azaltabilirler.

    Mesajınızı buraya yazın ve bize gönderin