2×Taq PCR MasterMix Ⅱ

Yüksek verimliliğe ve yüksek stres direncine sahip Rapid PCR ön karışımı.

2×Taq PCR MasterMix Ⅱ, DNA şablonu ve primerler dışında PCR reaksiyonundaki tüm gerekli parçalarla yeni optimize edilmiş ve yükseltilmiş, kullanıma hazır 2×PCR ön karışımıdır.

Kedi. Numara	Paket boyutu
4993001	1ml
4993002	5x1ml
4992912	20x5x1 ml
4992913	5×1ml
4992920	20×5×1ml
4992921	20×5×1ml

Bize e-posta gönder

Ürün ayrıntısı

Deneysel Örnek

SSS

Ürün etiketleri

Özellikleri

■ Yüksek amplifikasyon verimliliği: Farklı boyutlarda (5 kb'den düşük) DNA fragmanları ve kaynakları verimli bir şekilde amplifiye edilebilir.
■ Yüksek hassasiyet: 10 pg kadar düşük hedef fragmanlar, genomik şablonlardan amplifiye edilebilir.
■ Yüksek stres direnci: Kaba ekstre edilmiş şablon/bakteri kültürü gibi yüksek safsızlık içeriğine sahip şablonlar için hedef parça kolayca amplifiye edilebilir. Polimeraz aktivitesi, tekrarlanan donma ve çözülmelerden etkilenmeyecektir.
■ Uygulamalara uygun: Reaksiyon sistemi kolay ve hızlı bir şekilde hazırlanmıştır. Amplifiye edilmiş fragman, TA klonlaması için uygun olan 3' uç dA-çıkıntısını içerir.

Şartname

Tip: Taq DNA polimeraz
Örneklem: Saflaştırılmış/kaba ekstrakte edilmiş şablon/bakteri kültürü
Şablon: >10 sayfa
Parça boyutu: <5 kb
Uygulamalar: DNA parçalarının PCR amplifikasyonu, DNA etiketleme, primer uzatma, dizi belirleme, büyük ölçekli gen tespiti, yarı niceliksel PCR deneyleri, eser DNA tespiti vb.

Tüm ürünler ODM/OEM için özelleştirilebilir. Detaylar için,lütfen Özelleştirilmiş Hizmet'e tıklayın (ODM/OEM)

Öncesi: 2×GC açısından zengin PCR Karışımı

Sonraki: Golden Easy PCR Sistemi(boya ile)

Şekil 1. Farklı kaynaklardan gelen şablonlar, reaktiflerin stres direncini saptamak için sırasıyla TIANGEN Taq MasterMix II ve Tedarikçi TR'den ortak Taq Mix ile amplifiye edildi. Sonuçlar, TIANGEN ürünlerinin ham genomik şablonlardan ve bakteri kültüründen hedef parçaları büyütebildiğini ve stres direncinin Tedarikçi TR'den daha iyi olduğunu gösteriyor. A: TIANGEN TIANcombi DNA Lyse&Det PCR Kiti tarafından ekstrakte edilen ham genomik şablon. Prp/DN: İnsan kan örneklerinin ham ekstraksiyonu ve tespiti. Pirinç: Pirinç numunelerinin ham ekstraksiyonu ve tespiti. B: Koloni PCR. PCR parçası 700 bp'dir.
M: TIANGEN İşaretleyici III

Farklı kaynaklardan ve farklı uzunluklarda şablonlar için iyi evrensellik
Şekil 2. Farklı kaynak ve uzunluklardaki fragmanlar TIANGEN kullanılarak amplifiye edildi tak MasterMix II (A) ve sıradan tak Sırasıyla Tedarikçi TK (B), Tedarikçi TR (C), Tedarikçi V (D) ve Tedarikçi G (E) karışımı. Sonuçlar, TIANGEN ürünlerinin kapsamlı performansının amplifikasyon kapasitesi, özgünlük ve evrensellik açısından en iyisi olduğunu göstermektedir.M: TIANGEN Marker III1: Soya fasulyesi genomik DNA şablonu (120 bp);

2-3: Pirinç genomik DNA şablonu (694 bp, 2258 bp);

4: Pamuk genomik DNA şablonu (200 bp);

5: Escherichia koli genomik DNA şablonu (2298 bp);

6-7: Fare genom DNA şablonu (1 kb, 2 kb);

8-10: Sıçan genomik DNA şablonu (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

11-18: İnsan genom DNA şablonu (300 bp, 448 bp (GC%: %74,8), 1100 bp, 750 bp,

1000 bp, 1090 bp (GC%: %70,4), 2 kb, 4 kb)

Yüksek hassasiyet
Şekil 3. TIANGEN kullanılarak farklı konsantrasyonlarda sıçan ve insan DNA parçaları amplifiye edildi tak MasterMix II (A), sıradan tak Amplifikasyon hassasiyetini tespit etmek için sırasıyla Tedarikçi V (B) ve Tedarikçi TK (C) karışımı. Sonuçlar, TIANGEN ürününün genom şablonundan 0,01 ng kadar düşük hedef parçayı büyütebildiğini ve duyarlılığının, Tedarikçi V ve TK.M'nin ürünlerinden daha iyi olduğunu göstermektedir: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate giriş 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.

S: Amplifikasyon bandı yok

A-1 Şablonu

■ Şablon, protein safsızlıkları veya Taq inhibitörleri vb. içerir. ——DNA şablonunu saflaştırın, protein safsızlıklarını çıkarın veya saflaştırma kitleriyle şablon DNA'yı çıkarın.

■ Şablonun denatürasyonu tamamlanmadı ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

■ Şablon bozulması ——Şablonu yeniden hazırlayın.

A-2 Astar

■ Düşük kaliteli astar ——Astarı yeniden sentezleyin.

■ Primer bozulması ——Koruma için yüksek konsantrasyonlu primerleri küçük hacme bölün. Çoklu dondurma ve çözme işlemlerinden veya uzun süreli 4°C kriyoprezervasyondan kaçının.

■ Primerlerin uygun olmayan tasarımı (örneğin primer uzunluğu yetersiz, primerler arasında dimer oluşması vb.) - Primerleri yeniden tasarlayın (primer dimer ve sekonder yapı oluşumundan kaçının)

A-3 mg²⁺konsantrasyon

■ mg²⁺ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın²⁺konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-4 Tavlama sıcaklığı

■ Yüksek tavlama sıcaklığı, astar ve şablonun bağlanmasını etkiler. ——Tavlama sıcaklığını düşürün ve durumu 2°C'lik bir gradyanla optimize edin.

A-5 Uzatma süresi

■ Kısa uzatma süresi——Uzatma süresini artırın.

S: Yanlış pozitif

Olgular: Negatif örnekler aynı zamanda hedef dizi bantlarını da gösterir.

A-1 PCR Kontaminasyonu

■ Hedef dizi veya amplifikasyon ürünlerinin çapraz kontaminasyonu ——Negatif numunede hedef dizi içeren numuneyi pipetlememeye veya santrifüj tüpünden dökmemeye dikkat edin. Reaktifler veya ekipman, mevcut nükleik asitleri ortadan kaldırmak için otoklavlanmalı ve kontaminasyonun varlığı negatif kontrol deneyleri ile belirlenmelidir.

■ Reaktif kontaminasyonu ——Reaktifleri alikotlayın ve düşük sıcaklıkta saklayın.

A-2 Başbakanr

■ mg²⁺ konsantrasyon çok düşük —— Mg'yi uygun şekilde artırın²⁺ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

■ Uygun olmayan primer tasarımı ve hedef sekans, hedef olmayan sekans ile homolojiye sahiptir. ——Astarları yeniden tasarlayın.

S: Spesifik olmayan amplifikasyon

Olgu: PCR amplifikasyon bantları, büyük veya küçük olmak üzere beklenen boyutla tutarsız veya bazen hem spesifik amplifikasyon bantları hem de spesifik olmayan amplifikasyon bantları meydana geliyor.

A-1 Astar

■ Zayıf primer özgüllüğü

——Astarı yeniden tasarlayın.

■ Primer konsantrasyonu çok yüksek ——Denatürasyon sıcaklığını uygun şekilde artırın ve denatürasyon süresini uzatın.

A-2 mg²⁺ konsantrasyon

■ Mg²⁺ konsantrasyon çok yüksek ——Mg2+ konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-3 Termostabil polimeraz

■ Aşırı enzim miktarı ——Enzim miktarını 0,5 U aralıklarla uygun şekilde azaltın.

A-4 Tavlama sıcaklığı

■ Tavlama sıcaklığı çok düşük —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın veya iki aşamalı tavlama yöntemini benimseyin

A-5 PCR döngüleri

■ Çok fazla PCR döngüsü ——PCR döngüsü sayısını azaltın.

S: Yamalı veya lekeli bantlar

A-1 Astar——Kötü özgünlük ——Astarı yeniden tasarlayın, özgünlüğünü artırmak için astarın konumunu ve uzunluğunu değiştirin; veya yuvalanmış PCR gerçekleştirin.

A-2 Şablon DNA'sı

——Kalıp saf değil —— Kalıbı saflaştırın veya saflaştırma kitleriyle DNA'yı çıkarın.

A-3 mg²⁺ konsantrasyon

--Mg²⁺ konsantrasyon çok yüksek ——Mg'yi uygun şekilde azaltın²⁺ konsantrasyon: Mg'yi optimize edin²⁺ optimal Mg'yi belirlemek için 0,5 mM aralıklarla 1 mM ila 3 mM arasında bir dizi reaksiyonla konsantrasyon²⁺ Her şablon ve astar için konsantrasyon.

A-4 dNTP

——dNTP konsantrasyonu çok yüksek ——dNTP konsantrasyonunu uygun şekilde azaltın

A-5 Tavlama sıcaklığı

——Çok düşük tavlama sıcaklığı —— Tavlama sıcaklığını uygun şekilde artırın

A-6 Döngüleri

——Çok fazla döngü ——Döngü sayısını optimize edin

S: 50 µl PCR reaksiyon sistemine ne kadar şablon DNA eklenmelidir?

S: Uzun parçalar nasıl amplifiye edilir?

İlk adım, uygun polimerazı seçmektir. Normal Taq polimeraz, 3'-5' eksonükleaz aktivitesinin olmaması nedeniyle düzeltme okuyamaz ve uyumsuzluk, parçaların uzama etkinliğini büyük ölçüde azaltacaktır. Bu nedenle, düzenli Taq polimeraz, 5 kb'den büyük hedef fragmanları etkili bir şekilde çoğaltamaz. Özel modifikasyonlu Taq polimeraz veya diğer yüksek kaliteli polimeraz, uzatma etkinliğini artırmak ve uzun fragman amplifikasyonunun ihtiyaçlarını karşılamak için seçilmelidir. Ek olarak, uzun fragmanların amplifikasyonu aynı zamanda primer tasarımının, denatürasyon süresinin, uzatma süresinin, tampon pH'ının vs. uygun şekilde ayarlanmasını gerektirir. Genellikle 18-24 bp'lik primerler daha iyi verime yol açabilir. Şablon hasarını önlemek için, 94°C'deki denatürasyon süresi döngü başına 30 saniye veya daha azına düşürülmeli ve amplifikasyondan önce sıcaklığın 94°C'ye yükselme süresi 1 dakikadan az olmalıdır. Ayrıca, uzatma sıcaklığının yaklaşık 68°C'ye ayarlanması ve uzatma süresinin 1 kb/dk hızına göre tasarlanması, uzun fragmanların etkin amplifikasyonunu sağlayabilir.

S: PCR'nin amplifikasyon aslına uygunluğu nasıl geliştirilir?

PCR amplifikasyonunun hata oranı, yüksek doğrulukla çeşitli DNA polimerazları kullanılarak azaltılabilir. Şimdiye kadar bulunan tüm Taq DNA polimerazları arasında Pfu enzimi en düşük hata oranına ve en yüksek güvenilirliğe sahiptir (ekli tabloya bakınız). Enzim seçimine ek olarak araştırmacılar, tampon bileşimini optimize etme, termostabil polimeraz konsantrasyonu ve PCR döngü sayısını optimize etme dahil olmak üzere reaksiyon koşullarını optimize ederek PCR mutasyon oranını daha da azaltabilirler.

Mesajınızı buraya yazın ve bize gönderin