Manyetik Kan Lekeleri DNA Kiti

A-1 Başlangıç ​​örneğinde düşük hücre veya virüs konsantrasyonu —Hücre veya virüs konsantrasyonunu zenginleştirin.

A-2 Örneklerin yetersiz parçalanması —Örnekler parçalama tamponu ile iyice karıştırılmamış. 1-2 kez pulse vorteks ile iyice karıştırılması önerilir. —Proteinaz K'nin aktivite azalmasından kaynaklanan yetersiz hücre lizizi. -Yetersiz sıcak banyo süresi nedeniyle yetersiz hücre lizizi veya protein degradasyonu. Dokunun küçük parçalara kesilmesi ve lizattaki tüm kalıntıların uzaklaştırılması için banyo süresinin uzatılması önerilir.

A-3 Yetersiz DNA adsorpsiyonu. —Lizat döndürme kolonuna transfer edilmeden önce %100 etanol yerine etanol veya düşük yüzde eklenmedi.

A-4 Elüsyon tamponunun pH değeri çok düşük. —PH'ı 8.0-8.3 arasında ayarlayın.

Eluentte kalıntı etanol.

—Eluentte artık yıkama tamponu PW var. Etanol, döndürme kolonunu 3-5 dakika santrifüjleyerek ve ardından oda sıcaklığında veya 50°C inkübatörde 1-2 dakika süreyle yerleştirerek çıkarılabilir.

A-1 Numune taze değil. —Numunedeki DNA'nın bozulup bozulmadığını belirlemek için kontrol olarak pozitif bir numune DNA'sı çıkarın.

A-2 Uygun olmayan ön işlem. —Aşırı sıvı nitrojen öğütme, nem geri kazanımı veya çok büyük miktarda numunenin neden olduğu.

Ön işlemler farklı numuneler için farklılık göstermelidir. Bitki örnekleri için sıvı nitrojende iyice öğütüldüğünden emin olun. Hayvan numuneleri için sıvı nitrojen içinde homojenize edin veya iyice öğütün. G+ bakteri ve maya gibi kırılması zor hücre duvarlarına sahip numuneler için hücre duvarlarını kırmak için lizozim, litikaz veya mekanik yöntemlerin kullanılması önerilir.

4992201/4992202 Bitki Genomik DNA Kiti, ekstraksiyon için kloroform gerektiren kolon bazlı bir yöntemi benimser. Çeşitli bitki örneklerinin yanı sıra bitki kuru tozu için özellikle uygundur. Hi-DNAsecure Plant Kit de kolon bazlıdır, ancak fenol/kloroform ekstraksiyonuna ihtiyaç duymaz, bu da onu güvenli ve toksik yapmaz. Yüksek polisakkarit ve polifenol içeriğine sahip bitkiler için uygundur. 4992709/4992710 DNAquick Plant System, sıvı bazlı bir yöntemi benimser. Fenol/kloroform ekstraksiyonu da gerekli değildir. Saflaştırma prosedürü, numune başlangıç ​​miktarları için herhangi bir sınırlama olmaksızın basit ve hızlıdır, bu nedenle kullanıcılar miktarı deneysel gereksinimlere göre esnek bir şekilde ayarlayabilir. Büyük boyutlu gDNA fragmanları, yüksek verimle elde edilebilir.

Genomik DNA, TIANamp Blood DNA Kit ile farklı hacimlerde insan tam kan numunelerinden ekstrakte edildi. Sonuçlar aşağıdaki gibidir. Sonuçlar sadece referans olarak listelenmiştir, gerçek ekstraksiyon sonuçları numunelerin koşullarına bağlıdır.

Kan pıhtısı DNA ekstraksiyonu, protokolü basitçe kan pıhtısı DNA ekstraksiyonu için özel talimatla değiştirerek bu iki kitte sağlanan reaktifler kullanılarak gerçekleştirilebilir. Kan pıhtısı DNA ekstraksiyon protokolünün elektronik kopyası talep üzerine verilebilir.

Taze numuneyi 1 ml PBS, normal salin veya TE tamponu ile süspanse edin. Numuneyi bir homojenleştirici ile tamamen homojenleştirin ve santrifüjleyerek çökeltiyi bir tüpün dibine toplayın. Süpernatantı atın ve çökeltiyi 200 ul tampon GA ile yeniden süspanse edin. Aşağıdaki DNA saflaştırması talimata göre yapılabilir.

Plazma, serum ve vücut sıvısı örneklerinde gDNA'nın saflaştırılması için TIANamp Mikro DNA Kiti önerilir. Serum/plazma örneklerinden virüs gDNA'sının saflaştırılması için TIANamp Virus DNA/RNA Kiti önerilir. Bakteriyel gDNA'nın serum ve plazma örneklerinden saflaştırılması için TIANamp Bakteri DNA Kiti önerilir (pozitif bakteri için lizozim dahil edilmelidir). Tükürük örnekleri için Hi-Swab DNA Kiti ve TIANamp Bacteria DNA Kiti önerilir.

Mantar genomu ekstraksiyonu için DNAsecure Plant Kit veya DNAquick Plant System önerilir. Maya genomu ekstraksiyonu için TIANamp Maya DNA Kiti önerilir (litikaz kendi kendine hazırlanmalıdır).